Bakterielle Endotoxin Testmethoden Pharmazeutische Richtlinien
Die Zugabe einer Lösung Endotoxine zu einer Lösung des Lysats erzeugt Trübung, Fällung oder Gelierung der Mischung enthält. Jedoch kann die Zugabe eines chromogenen Substrats zu einer Lösung des Lysats führt zu Farbentwicklung aufgrund der Freisetzung von Chromophoren aus dem Substrat bei Aktivierung durch das Endotoxin in der Lösung vorhanden. Die Reaktionsgeschwindigkeit hängt von der Konzentration des Endotoxins, der pH-Wert und der Temperatur ab. Die Reaktion erfordert die Anwesenheit von bestimmten zweiwertigen Kationen, einem Gerinnungskaskade Enzymsystem und Gerinnsel können Protein, von denen alle durch das Lysat vorgesehen sind.
Die Mengen an Endotoxinen in definierten Endotoxin-Einheiten (EU) ausgedrückt. Mit der Verabschiedung des zweiten Internationalen Standard für Endotoxin durch den Sachverständigenausschuss für biologische Standards der Weltgesundheitsorganisation, 1EU = 1 IU.
Die Endotoxin-Grenze für eine gegebene Testvorbereitung aus dem Ausdruck K / M berechnet wird, wobei M die maximale Dosis für einen Erwachsenen (70 kg angenommen als für diesen Zweck) pro kg pro Stunde verabreicht wird. Der Wert von K ist 5,0 EU / kg für parenterale Zubereitungen mit Ausnahme derjenigen, intrathekal und 0,2 EU / kg für Zubereitungen, intrathekal verabreicht werden.
(A) im Fall von Gel-Clot-Methoden, die Empfindlichkeit des Lysats;
(B) im Fall von quantitativen Verfahren, die Linearität der Standardkurve;
(C) das Fehlen störender Faktoren, die die Reaktion hemmen oder verstärken oder auf andere Weise mit dem Test auf der Zubereitung unter Prüfung stören;
(D) die Angemessenheit des Behälters Adsorption von Endotoxinen zu widerstehen.
spezielle Reagenzien
Endotoxin Referenzstandard und Steuer Standard-Endotoxin.
Der Endotoxin-Referenzstandard (ERS) ist das gefriergetrocknete, gereinigtes Endotoxin von Escherichia coli, die in Endotoxin-Einheiten (EU) im Vergleich mit dem Internationalen Standard kalibriert.
Der Referenz-Standard-Endotoxin (ERS) oder jede andere geeignete Zubereitung der Aktivität, die in Bezug auf das ERS bestimmt wurde oder der International Standard eines Gel-Gerinnsel oder andere geeignete Verfahren.
Das gefriergetrocknete Endotoxin sollte intermittierend für 30 Minuten durch Mischen mit Wasser rekonstituiert wird BET einen Vortexer. Das Konzentrat sollte nicht mehr als 28 Tage im Kühlschrank aufbewahrt werden. Anschließende Verdünnungen des Konzentrats sollten kräftig durch Mischen hergestellt werden, für nicht weniger als 3 Minuten vor dem Gebrauch. Jede Verdünnung soll nicht weniger als 30 Sekunden gemischt werden, bevor die nächste Verdünnung zu machen fortfahren.
Ein Lysat von Amöbozyten von einem der Arten des Pfeilschwanzkrebses Limulus polyphemus, Tachypleus gigas, Tachypleus tridentatus Carcinoscorpius rotundicauda oder auf dem Etikett, wie angegeben rekonstituiert. Die Art, aus dem das Lysat erhalten wird, wird auf dem Etikett angegeben.
Wasser BET:
0,1 M Salzsäure BET: Vorbereiten von Salzsäure Wasser BET verwenden. Nach Einstellung des pH von 6,0 auf 8,0 mit BET 0.lM Natriumhydroxid gibt es ein negatives Ergebnis unter den Bedingungen des Tests.
0,1 M Natriumhydroxid BET: Vorbereiten von Natriumhydroxid Wasser BET verwenden. Nach Einstellung des pH-Wertes auf 6,0 bis 8,0 mit 0,1 M Salzsäure BET gibt es ein negatives Ergebnis unter den Bedingungen des Tests.
Tris-Chlorid-Puffer pH 7,4 BET .: Man löst 0,6057 g Tris (hydroxymethyl) -methylamin in 30 ml Wasser BET, fügen 0,33 ml Chlorwasserstoffsäure, verdünnt auf 100 ml mit Wasser BET und mischt. Es gibt ein negatives Ergebnis unter den Bedingungen des Tests.
Die folgenden Verfahren können verwendet werden, um die Endotoxin-Konzentration in einem Produkt Beamten im Arzneibuch zu überwachen und zu bestimmen, ob das Produkt mit der Grenze in der Monographie angegebenen entspricht.
Siehe auch: