Reinigung von mikromolaren Mengen von Nukleotidanaloga durch Umkehrphasen-Hochleistungs

Öffnet den Autor Arbeitsbereich ein. Zahlen und Buchstaben entsprechen die Zugehörigkeit Liste. Klicken Sie diese im Autorenarbeitsbereich b zu belichten. Zahlen und Buchstaben entsprechen die Zugehörigkeit Liste. Klicken Sie diese im Autorenarbeitsbereich ein Biochemie / Biophysik Programm, Institut für Biologische Chemie, Washington State University, Pullman, Washington 99164-4660 USA b Department of Chemistry, Washington State University, Pullman, Washington 99164-4660 USA aussetzen

Die Trennung von Adenosin-5'-Di- und Triphosphate von anorganischem Pyrophosphat oder Imidodiphosphat kann durch Triethylammoniumbicarbonat (pH 6,7) gepuffert unter Verwendung eines Lösungsmittelsystems mit Umkehrphasen-HPLC erreicht werden. Dieser Puffer wurde verwendet, da sie neutral war, leicht flüchtig bei 20 ° C und gebildet Ionenpaare mit Phosphatverbindungen, deren Trennung durch Umkehrphasen-Chromatographie zu erlauben. Mikromolare Mengen an radioaktiven oder fluoreszierenden Nukleotidanaloga gereinigt wurden unter Verwendung von C-18-Säulen oder eine Polystyrol-Divinylbenzol-Säule (PRP-1, Hamilton) mit dem Lösungsmittelsystem beschrieben. Das Verfahren ist besonders vorteilhaft bei der Herstellung von salzfreien säure-, basen-, oder thermisch labile Nukleotidanaloga. Es ist möglich, mit dieser Methode 32 Pi zu entfernen (173 umol) aus ATP (50 & mgr; mol, 30 mg) in einem Durchlauf eine analytische C-18 Säule unter Verwendung was zeigt, dass dieser Ansatz für ausgewählte semipräparative purifications nützlich sein kann.