Blots Test, Slot Blots & Dot Blots - Immunnachweis, Bio-Rad
Test-Blots, wie ihr Name schon sagt, sind sehr einfach Western-Blots, die für den ausdrücklichen Zweck der Optimierung und Fehlerbehebung von experimentellen Bedingungen geschaffen werden. Sie werden üblicherweise durch Ausführen mehrerer Bahnen aus dem gleichen Lysat oder gereinigte Proteinlösung auf einem Gel, und nach der Übertragung Schneiden des Blots in Streifen hergestellt einzeln getestet werden.
Sie bieten eine schnelle und effiziente Möglichkeit, eine Reihe von Antikörperverdünnungen oder Detektionssubstraten untersucht
Dot Blots und Slot-Blots sind auch eine sehr nützliche Variante der typischen Western-Blot. Sie benötigen keine Gelelektrophorese, so gibt es keine Trennung der Proteine nach Größe.
Stattdessen wird das Zielprotein oder Zelllysat Gemisch direkt auf die Oberfläche der Nitrocellulose oder PVDF-Membran gegeben. Protein-Lösungen können direkt in einem kleinen Volumen angewendet werden, oder mit einem Vakuumverteiler ein geordnetes Raster von Proben ähnlich der in Figur 14. Jeder Dot- oder Slot-Blot enthalten würde die bekannte Mengen an Zielprotein oder Zelllysat gesehen zu erzeugen.
Einmal trocken, Dot-Blots und Slot-Blots werden mit den gleichen Immunodetektion Schritten unterzogen für Western-Blotting verwendet, d.h. blocking, Antikörperinkubation und Zielerfassung mit dem Substrat. Graue und schwarze Flecke auf der Abbildung unten zeigen an, welche Proben für das Zielprotein positiv sind und entspricht in etwa die auf einem Western-Blot erzeugten Banden.
Abbildung 14. Dot Blots und Slot Blots. Die Dot-Blots auf der linken Seite repräsentieren eine Verdünnungsreihe einer Probe, mit kleineren leichteren Punkten auf niedrigere Konzentrationen des Zielproteins entspricht. Die Slot-Blots stellen eine Gruppe von Stichproben, die Intensität des Signals in dieser Probe zu der Konzentration des Zielproteins entspricht.
Der größte Nachteil an Slot-Blots / Dot-Blots ist, dass sie keine Informationen über das Molekulargewicht bereitzustellen. Somit ist es schwieriger, falsch-positive Signale zu erfassen oder zu erkennen, ob modifizierte Formen eines Proteins vorhanden sind.