Einfrieren Bakterien mit Glycerol-Protokoll
Das folgende Protokoll stellt eine Alternative zu den Bakterien Freezing Kit OPS Diagnose. Dieses Kit ist ein gebrauchsfertiges zu bedienende Produkt, das 162 Fläschchen (mit Perlen und Glycerin), zwei kryogene Gestellen und Inkjet / Etiketten-Laser umfasst, die gegenüber Lösungsmitteln beständig sind. Weitere Informationen auf die Produktseite für bakteriellen Freezing Kit.
Bakterien können unter Verwendung einer Lösung von 15% Glycerin eingefroren werden. Das Verfahren ist einfach und erfordert Schraubdeckel Microfuge-Röhrchen und steriles Glycerin. Das Glycerin wird auf 30% verdünnt, so dass es leicht zu Pipette ist. Gleiche Mengen von 30% Glycerin und Kulturbrühe werden gemischt, in Röhrchen dosiert und dann eingefroren. Ein Kit verfügbar ist (Bacterial Freezing Kit) durch OPS-Diagnose, die die Herstellung von sterilen Röhrchen für dieses Verfahren vereinfacht.
Bereiten eine Lösung von 30% Glycerin (v / v) mit 30 ml Glycerin mit 70 ml Wasser vermischt. Die Lösung wird in einem Schraubdeckel-Glasflasche und Sterilisieren durch Autoklavieren bei 121 ° C für 15 min. Lösen Sie die Kappe während des Autoklavierens.
Aliquot 500 ul steriler 30% Glycerin in sterilen 2 ml sterilen Mikrozentrifugenröhrchen mit 4 mm Glasperlen *.
Gib 500 & mgr; l der Bakterienkultur in das Röhrchen und Mischen mit dem Glycerol eines Vortexer.
Das Röhrchen mit dem Organismus Namen, Stamm, Datum usw.
Das Röhrchen wird in den Gefrierschrank und notieren Sie seine Lage.
Um Bakterien zu aktivieren, müssen nur ein paar Perlen aus dem Rohr entfernt werden. Das Rohr muss nicht aufgetaut werden. Öffnen Sie das Rohr und lösen ein paar Perlen mit einer sterilen Pipettenspitze. Gießen Sie die losen Perlen auf eine Agar-Platte und rollen sie herum. Kolonien, die sich entwickeln sollte erneut ausgestrichen werden. Ersetzt den Schlauch in den Gefrierschrank sofort. Wenn die Kultur auftaut, nicht wieder einfrieren als Zellen typischerweise sehr empfindlich gegen Einfrieren und Auftauen sind. Entsorgen Sie die aufgetaute geeignete Kultur.
* Wir bevorzugen Rohre, die Schraubkappe sind und Kappen mit O-Ringen. Eine Möglichkeit ist das Rohr 1/3 mit 4 mm Glasperlen (Produktnummer BAWG 4000-200-18) vor dem Sterilisieren zu füllen. Wenn Bakterien Abrufen, entfernen oder eine Perle auf einer Agarplatte Chip aus und wälzen die Bakterien zu dispergieren. Dadurch wird vermieden, den gesamten Bestand Auftauen.