Griffin Antikörper Verwandte Lösungen - Rezepte
- 30% Acrylamid: 300 g Acrylamide
- 0,8% Bisacrylamid: 8,0 g Bisacrylamid
Methoden: Zu 500 ml Stammlösung machen
I) Platz 300 ml ddH20 in Becherglas mit Rührstab
II) In 150,0 g Acrylamid zum H20 unter Rühren
III) In 4,0 g Bisacrylamid zum H20 unter Rühren
IV) ermöglichen die Acrylamid - Bisacrylamid aufzulösen
V) Bringen des Endvolumens auf 500 ml
VI) Nutsche das Acrylamid / Bisacrylamid-Lösung
Antikörper Rekonstitution
Rinderserumalbumin
BSA ist ein Stabilisierungsprotein in Peptide und Antikörperlösungen verwendet, um Proteinaggregation abzuschwächen. BSA wird in vielen biochemischen Reaktionen aufgrund seiner Stabilität, der Mangel an Wirkung verwendet, und seiner geringen Kosten, da große Mengen davon können leicht aus Rinderblut, ein Nebenprodukt der Rinderindustrie gereinigt werden.
Spezifikationen für den Einsatz mit Forschungsantikörpern
- US-amerikanische Herkunft oder USDA zertifiziert
- Fraktion V-Pulver
- Hitzeschock-behandelt
- proteasefrei
- DNAse frei
- RNAse frei
- IgG frei
- fettsäurefrei
Bloom-Zahl ist ein Hinweis auf die Stärke eines Gels aus einer Lösung bekannter Konzentration gebildet. Die Bloom-Einheit ist ein Maß für die Kraft (Gewicht) erforderlich, um eine gegebene Probenfläche von Gel einem Abstand von 4 mm drücken; Je höher die Bloom-Zahl ist, desto stärker ist das Gel.
Bloom-Zahl ist proportional zu dem durchschnittlichen Molekulargewicht:
Bloom zahlengemittelte Molekulargewicht
50-125 (Low Bloom) 20.000 - 25.000
175-225 (Medium Bloom) 40.000 - 50.000
225-325 (High Bloom) 50.000 - 100.000
Gelatine ist eine heterogene Mischung aus wasserlöslichen Proteinen von hohen mittleren Molekulargewichten, die in Kollagen. Die Proteine werden durch Kochen Haut, Sehnen extrahiert, Bänder, Knochen usw. in Wasser. Typ ist eine Gelatine, die aus säureausgehärteten Gewebe und Gelatine Typ B ist abgeleitet von lime gehärteten tissue.1 Gelatine wird als Stabilisator, Verdickungsmittel und Texturierungsmittel in Lebensmitteln verwendet werden; bei der Herstellung von Gummiersatzstoffen, Klebstoffe, Zemente, lithographische und Druckfarben, Kunststoffcompounds, Kunstseide, photographische Platten und Filme, übereinstimmt, und Licht-Filter für Quecksilberlampen; in Textilien; zu hemmen Kulturen Kristallisation in der Bakteriologie und vorzubereiten; in PCR-Hybridisierung in der Molekularbiologie; in der pharmazeutischen Industrie als Suspensionsmittel, Einkapselungsmittel und Tablettenbindemittel; und in der Veterinärmedizin als Plasmaexpander und hämostatische Schwamm.
Glycerin ist eine farblose, geruchlose, viskose Flüssigkeit. Glycerol ist ein verbreiteter Bestandteil von Lösungsmitteln für enzymatische Reagenzien bei Temperaturen unter Null Grad Celsius gelagert werden, da die Lösung viskos und in der Lage bleiben pipettieren. Glycerol verdrängt Wasser in Lösung und minimiert Protein Konformationsänderungen Bewegungen.
Natriumazid
Natriumazid ist eine ionische chemische Verbindung mit der Formel NaN3. Das farb- Azidsalz zugegeben bakterielle Kontamination zu verhindern; Natriumazid wirkt als bakteriostatisch durch Cytochrome Oxidase in gram-negativen Bakterien zu hemmen. Inaktiviert HRP.
Thimerosal
- 0,2 ug / ul in 1X PBS, 0,2% Gelatine, 0,1% Natriumazid; Shop bei 4 ° C
Typ B Kalb Gelatine, 100 Bloom
Konzentrierte ChIP - EMSA Grad
Auch bekannt als ‚transcruz‘ oder ‚X‘ Form
- 2,0 ug / ul in 1X PBS, 0,1% Natriumazid; Shop bei 4 ° C oder -20 ° C (aliquote wenn gefroren)
In vitro / biologische Studie Grad
- 2,0 ug / ul in 1X PBS sterilfiltriert
Konjugierte Antikörper-Lösungen
Meerrettich-Peroxidase
Thimerosal ist notwendig, weil Natriumazid ein irreversibler Inhibitor von HRP ist. Thimerosal enthält 49,6% Quecksilber. Quecksilber ist streng das Eindringen von Abwasser verboten. Obwohl eine einzige Lösung, die eine niedrige Konzentration besitzt, Quecksilber wird von Algen und Bakterien in Abflussrohren bioakkumuliert. Es ist diese Bioakkumulation und die weitere Entsorgung von Quecksilber in der Kanalisation, der Beseitigung Verletzungen potetntially beitragen kann.
Alkalische Phosphatase
Fluorochromen
- (Protein A / G / L und CnBr Agarose-Konjugate) 1X PBS, 0,02% Natriumazid
Steuerungslösungen
Kontroll-IgG
Kontrollseren
Blockierungspuffer (Rinderserumalbumin)
- 20 mM Tris: 2,42 g Tris-Base pH 7,4 w / HCl
- 150 mM NaCl: 8,76 g NaCl
- 0,01% Tween-20: 0,1 ml Tween-20
- 3% BSA: 30,0 g BSA (Fraktion V)
- 0,02% NaN3: 10,0 ml 2% NaN3
Blockierungspuffer (Milch)
- 20 mM Tris: 2,42 g Tris-Base pH 7,4 w / HCl
- 150 mM NaCl: 8,76 g NaCl
- 0,01% Tween-20: 0,1 ml Tween-20
- 5% Milch: 50,0 g fettfreie Trockenmilch
- 0,02% NaN3: 10,0 ml 2% NaN3
Carbonatpuffer
Um 1 Liter 50 mM pH 8,2-9,6
- Natriumcarbonat (105.99 g / mol): 5,3 g
- pH-Wert sollte um pH 8,2 starten +/- 5 M NaOH verwenden Sie den pH-Wert dieser Puffer auf 9,6 zu erhöhen
- Optionale Zusatz 0,02% NaN3
Casein-Lösung
1. Hinzufügen einer geeigneten Menge von Hammersten Casein Grade an den Puffer in einem Becherglas mit einem magnetischen Rührstab. (Empfohlene Konzentration beträgt 0,5%, maximal lösliche Kasein beträgt 1%.)
2. Setzen Sie den Becher auf einem Magnetrührer / Heizplatte.
3. Rühren gründlich unter Erwärmen, bis die Lösung wird durchscheinend. Schaumbildung vermeiden.
Caspase Substratpuffer
Zellkulturlösung Vorbereitungen
- Achten Sie darauf, dass das Kulturmedium enthält ein Antibiotikum (penn / Streptomycin); Dies allein wird die Mehrheit der Kontamination Probleme verhindern.
- Löst kleines Molekül Solute in entweder 100% iges Ethanol oder 100% DMSO. Diese Lösungsmittel sind nicht förderlich für Bakterien- oder Pilzwachstum, und mit ihnen werden Verunreinigungen verhindern, dass in einer Stammlösung multipliziert wird.
Sterilfiltration
- Kleine Moleküle können steril filtriert durch ein 0,22 um Filter sein. Es wird einiger Verlust des Produkts zu dem Filter sein. Sterilfiltration ist die beste Vorsichtsmaßnahme, die vor Verschmutzung getroffen werden kann; aber der Verlust an Material zu dem Filter kann auch eine gewisse Variabilität in das Experiment einzuführen.
Coomassie Stain
- Man löst 2 g Coomassieblau (Serva Blau) in 250 ml Wasser
- Langsam 75ml Eisessig hinzufügen
- In 500 ml Ethanol
- q.s. mit Wasser auf 1000 ml
Endkonzentrationen: 0,2% Coomassie-Blau 7,5% Essigsäure 50% Ethanol
- Methanol 20%: 800 ml
- Eisessig 5%: 200 ml
- H2O 75%: 3 L
Kopplungsverhältnisse (F: P)
- 3 bis 8 Biotin pro IgG-Molekül (Biotin MW: 244)
- 4 bis 7 FITC pro IgG-Molekül (FITC MW: 390)
- 1 bis 2 HRP pro IgG-Molekül (HRP MW: 40000)
- 1 APC pro IgG-Molekül (APC MW: 100.000)
In 0,1% DEPC bis H20
Gut schütteln und Autoklav
DMSO Fahrzeugsteuerung
Dimethylsulfoxid (DMSO) ist eine klare wasserlösliche Flüssigkeit, die sowohl polare als auch unpolare Verbindungen auflösen kann.
Ausfällung des Inhibitors aus der DMSO-Lösung, wenn sie in wässrige Medien pipettiert wird, ist eine Eigenschaft einiger DMSO löslichen Inhibitoren. DMSO löslichen Inhibitoren, die anfällig für Ausfällung sind, können Verdünnung in wässrigen Medien durchlaufen, aber die Medien 0,1-0,5% DMSO enthalten sollten, bevor der Inhibitor hinzugefügt wird, und sie müssen sehr schnell Niederschlag zu vermeiden gemischt werden.
Ideal maximale Menge an DMSO im Verhältnis zu den Medien ist 0,1%, da allein DMSO erhebliche Nebenwirkungen haben kann. Das% DMSO, die cytotoxisch Zellen beträgt im allgemeinen 0,1% und darüber. Die Endkonzentration von DMSO sollte idealerweise nicht mehr als 0,5% nicht überschreiten.
Epitopmarkierung Sequenzen
FLAG-Epitop
5' GAC TAC AAG GAC GAC GAT GAC AAG 3'
3' CTG ATG TTC CTG CTG CTA CTG TTC 5'
D Y K D D D D K