Kompetente Zellen für die Transformation, Sigma-Aldrich
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Hintergrund
Gründe für die Transformation
Das Phänomen der natürlichen Transformation Bakterienpopulationen aktiviert werden, damit große Schwankungen der Populationsdynamik überwinden und die Herausforderung der Aufrechterhaltung der Bevölkerungszahlen in rauen und extremen Umweltveränderungen zu überwinden. Während solcher Bedingungen freisetzen Einige Bakteriengattungen spontan DNA aus den Zellen in die Umgebung frei von den zuständigen Zellen aufgenommen werden. Die kompetenten Zellen auch auf die Änderungen in der Umgebung reagieren und das Niveau der Gen-Akquisition durch natürliche Transformationsprozess steuern.
Abbildung 1: Schematische Darstellung der Transformation in Bakterien
Kompetenz von Bakterien
Nicht alle Bakterien, die Aufnahme exogene DNA, die aus ihrer Umgebung. Der praktische Ansatz kompetente Zellen zu erwerben, ist die Bakterienzellen künstlich kompetenten Verwendung von Chemikalien oder elektrische Impulse zu machen.
- Chemische Induktion von Kompetenz umfasst folgende Schritte:
- die Zellen in Gegenwart von Calciumphosphat (Katalognummer 50552), Kühlen, um sie permeabel
- Inkubation mit DNA
- Hitzeschockbehandlung bei 42 ° C für 60-120 Sekunden, die die DNA in die Zellen einzudringen verursacht
Hinweis: Um die Hitzeschock-Behandlung zu ertragen, ist es wichtig, die verwendeten Zellen in der logarithmischen Wachstumsphase sind
- Alternativ werden die Bakterienzellen durchlässig gemacht, indem sie in elektrische Impulse, einem Prozess, der als Elektroporation unterworfen wird.
Sigma-Aldrich bietet eine breite Palette von chemisch kompetenten Zellen und elektrokompetenten Zellen. Wählen Sie das richtige Produkt für Sie mit unserem Selection Guide.
Anwendungen der Transformation
- mehrere Kopien der DNA zu machen
- in Klonierungsvorgehensweisen
- große Mengen von Proteinen und Enzymen auszudrücken
- bei der Erzeugung von cDNA-Bibliotheken
- in der DNA-Kopplungsstudien
Anforderungen Typische Umwandlungsreaktion
Die benötigten Materialien und das detaillierte Protokoll der Transformation ist hier zu finden.
Die Berechnung der Transformationseffizienz
Die Transformationseffizienz wird als die Anzahl von Transformanten pro ug Supercoiled-Plasmid-DNA in der Umwandlungsreaktion verwendet erzeugten definiert.
Die Transformationseffizienz wird mit der folgenden Formel berechnet:
Anzahl der Kolonien auf dem Teller (df)
DNA-Menge ausplattiert (ng)
Factors Affecting Transformationseffizienz
Vergleich der Transformation und Transfektion
Anwendbar auf Bakterien
Anwendbar auf eukaryotische Zellen *
Exogene genetische Material wird durch kompetente Bakterien aufgenommen
Exogene genetische Material wird in die eukaryotischen Zellen eingebracht
Bakterien können sich kompetent werden entweder chemisch oder durch Elektroporation
Das exogene genetische Material wird entweder in das Genom integriert oder abgebaut
Transformation ermöglicht die Expression multipler Kopien der DNA, was zu großen Mengen an Protein oder Enzym, das normalerweise nicht durch Bakterien exprimiert
* Eukaryotischen Zellen, die zelluläre Veränderungen unterliegen und durch eine erhöhte Proliferation bösartig werden auch als „transformierte“ Zellen bezeichnet. Diese Transformation ist durch eine Fehlregulation im Gen, mRNA und / oder Protein-Ebene und ähnelt nicht Transformation in Bakterien.