MRNA- und cDNA-Klonierung
(Iii) Wenn mehr als eine mRNA kann für ein bestimmtes Gen hergestellt werden könnten Sie feststellen, dass Sie zwei Arten von cDNA aus klonen kann, sagen wir, Leber-RNA. Diese cDNA-Sequenzen könnten zeigen, dass eine Form Spleißstellen Exon 1 bis Exon 2 und Exon 2 bis exon3, während der andere könnte Exon 1 gerade Spleiß 3. Exon Wie können Sie am einfachsten ermitteln (experimentell), wenn die gleichen zwei Splice-Formen existieren in Lymphozyten mRNA?
(Iv) Normalisieren cDNA-Bibliotheken können helfen, Vertreter verschiedenen Gene zu sammeln mehr wirtschaftlich durch die Vermeidung viele cDNA-Kopien von einer reichlichen mRNA für jede Kopie eines weniger gut exprimierte mRNA aufnehmen. Bitte erläutern Sie die wichtigsten Grundsätze in Normalisierung beteiligt (nicht die experimentellen Details oder ein anderer Teil der cDNA-Bibliothek Konstruktion, die irrelevant ist.
(V) Ist auch eine Normalisierung hilft Ihnen anders gespleißte Formen eines bestimmten Gens zu sammeln, indem die relative Häufigkeit dieser unterschiedlich gespleißter mRNAs Ausgleichs? Und wenn ja, warum?
Lösung Vorschau
In der „Eingabe der Abfragesequenz“ geben Sie die Sequenz, die Sie haben und wählte dann den Organismus als Maus. die Sequenz mit dem Maus-Genom nach dem Strahl, würden Sie das Protein und dann auf der Sequenz des Proteins klicken, um die Aminosäuren zu sehen.
(Ii) Zunächst einmal kann die cDNA cloniert werden und dann sequenziert. Da ist das Maus-Genom.
Die mRNA und cDNA klonen Probleme eingebettet.
. Um eine cDNA über PCR-Klon: -obtain eine Quelle von mRNA wahrscheinlich die enthalten
mRNA aus dem Gen von Interesse. Zum Beispiel, wenn Ihr Gen.
. erweitert durch reverse Transkriptase und die restliche mRNA entfernt wird. die cDNA an die
Plasmide konstruieren, um die cDNA kann. in E. coli-Bakterien tausende zu klonen.
. Dies ist der Teil der mRNA, die Codes für die Aminosäuren. . 25-30 Nukleotiden
in der Länge, die verwendet werden können, um die cDNA und erlauben die Klonierung in den zu verstärken.
. Plasmid-Sequenz mit der T7-RNA-Polymerase-Sequenz eingefügt. Biology Analyse, DNA
Sequenzierung und DNA Biochemie, siehe Molecular Cloning. A Techniken.
. Derzeit umfasst dieses Thema solche allgemeine Beispiele, wie das Klonen. Stammzellen (Erwachsener,
Nabelschnur und. (1,2), Virus von RNA und DNA vorgenommen werden, die nicht kann.
. Alterung, DNA daher adulten Zelle, ist. Der Klon hat daher ein potenzielles
an etwas leiden . Telomerase), die diese Telomere mit einer RNA-Matrize erstreckt.
. Erklären, wie es als ein Vektor für die Klonierung von rekombinanter DNA verwendet wird. . Es hat
genetische Form von entweder DNA oder RNA, die durch Proteinhülle verkapselt. .
. Host genannt wird, eine Bibliothek zu schaffen, eine Klonbank oder .DNA aus der reversen Transkription
der mRNA-Spezies oder .cDNA spiegelt die Exons eines Gens, das Wesen ist.
. kompatible klebrige Enden zwischen pTrcHisB und Ihre T7-RNA-Polymerase-Einsatz. die Scharten
Verwendung von T4-DNA-Ligase durch Phosphodiester-Bindungen bilden können. . A. Klonierung Strategien. .