Nukleinsäure-Blotting
Nukleinsäure-Blotting ist eine gut etablierte Technik zur Herstellung einer genomischen Region lokalisiert, Gene oder andere Sequenz von Interesse aus einem komplexen Gemisch von DNA oder RNA. Das erste Blot-Verfahren wurde nach seinem Erfinder, der britischen Biologen Edwin Southern benannt.
Southern-Blotting verwendet, um eine Sequenz in einer DNA-Mischung zu detektieren, und Northern-Blotting detektiert eine Sequenz, die in einem RNA-Gemisch. Süd- und Northern Blot sind die beiden häufigsten Nukleinsäure-Blotting-Techniken.
- Southern-Blotting kann, wie beispielsweise Erfassen große Genumlagerungen / Löschungen und große Trinukleotid Wiederholungsdehnungen in Mapping-Genen und hat Anwendungen verwendet werden.
- Northern Blot ermöglicht die Messung der Genexpression, zum Beispiel in der Forschung Studien zur Differenzierung, Morphogenese und genetischen Anomalien.
Blotting umfasst die elektrophoretische Trennung von Nucleinsäuren in einem Gel, einer Übertragung der getrennten Komponenten zu einer Membran und Nachweis von spezifischen Sequenzen, die durch die Membran Sondieren. Der Transfer und die Immobilisierung auf der Membran bilden die Nukleinsäuren an Sonden für den Nachweis verwendet, die nicht leicht das Gel ein.
Alternative Techniken, wie die Polymerasekettenreaktion (PCR) haben Blotting in vielen Anwendungen ersetzt, die den empfindlichen Nachweis oder zur Quantifizierung von Nukleinsäuresequenzen in komplexen Mischungen erfordern. Trotz dieser, Southern Blotting hat immer noch seine Vorteile, beispielsweise bei der Bestimmung der Position von Sequenzen in großen Fragmente, Detektieren chromosomaler Umordnungen, Aufnehmen verwandten Sequenzen mit geringeren Homologie, und Bestimmen der Anzahl von Genkopien.
Blotting besteht aus vielen Schritten. Um sicherzustellen, Erfolg, arbeiten nach hinten in systematischer Weise - stellen Sie sicher, dass der Erfassungsschritt auf Rohstoff funktioniert, bevor Gele und die Übertragung von Nukleinsäuren an der Membran läuft.
In Northern-Blotting, sollte große Sorgfalt Abbau von RNA durch allgegenwärtige RNasen zu vermeiden.