Vorbereitung und Lagerung von Nährmedien
Vorbereitung und Lagerung von Nährmedien
Vorsichtsmaßnahmen - dehydriert Medien
Licht
Feuchtigkeit
Temperatur und Zeit
Herstellung von dehydrierten Medien
Die Rekonstitution von dehydriert Medien
Sterilisation von Kulturmedien
Sterilisation überprüft
Hitzen Effekte
Fehlertabelle und mögliche Ursachen in Mediensterilisation
Herstellung von sterilisierten Medien
Lagerung von vorbereiteten Medien
Vorsichtsmaßnahmen bei der Verwendung und Entsorgung von vorbereiteten Medien
Vorsichtsmaßnahmen - dehydriert Medien
Benutzerlaborqualitätskontrolltests auf vorbereiteten Medien
Das Kulturmedium muss bei der angegebenen Temperatur gelagert werden, unter bestimmten Bedingungen und nicht länger als die Haltbarkeitszeiten angemessen zu jedem Produkt. Die Lagerbedingungen und das Ablaufdatum der einzelnen Produkte sind auf den Etiketten oder Produkteinsätze gezeigt, aber die folgenden allgemeinen Regeln werden dazu beitragen, dass sie in einer optimalen Umgebung gehalten werden. Bei der Lagerung von Produkten beachten Sie die Haltbarkeit Verfallsdaten auf den Etiketten und verwenden Sie die Produkte in der Reihenfolge ihrer Menge / Chargennummern.
Alle vorbereiteten Kulturmedien und die Komponenten sollten vor Licht und direkte Sonneneinstrahlung gelagert werden entfernt sollte unter allen Umständen vermieden werden.
Sealed Glas- und Kunststoffbehälter sind unbeeinflusst von normalen Labor Feuchtigkeit. Geöffnete Behälter entwässertes Pulver wird durch hohe Feuchtigkeit beeinträchtigt werden. Hot, dampfig Medien Vorbereitungsräume sind nicht geeignet Umgebungen Behälter von Kulturmedien zu speichern; insbesondere Behälter, die häufig geöffnet und geschlossen werden. Ein benachbarter Kühlraum oder eine ausreichende Lagerschrank vorzuziehen Lagerflächen.
Temperatur und Zeit
Die Temperaturlagerbedingungen von Kulturmedien und die Komponenten sind sehr unterschiedlich. Folgende Produktgruppen werden dazu beitragen, die verschiedenen Anforderungen zu unterscheiden.
Kulturmedien. Versiegelte ungeöffnete Behälter bei Raumtemperatur 15-20 ° C gelagert werden. Geöffnete Behälter sollten die Kappe oder Deckel vorsichtig haben und sicher ersetzt. Es ist wichtig, dass angebrochene Gebinde in einer trockenen Atmosphäre bei Raumtemperatur gelagert werden. Haltbarkeit 1 bis 5 Jahre.
Vorbereitet Broth Medien. Bei 2-8 ° C. Lassen Sie die Produkte einzufrieren. Haltbarkeit von 6 Monaten bis 2 Jahren.
Es ist jedoch wichtig, die Lagerung von vorbereiteten Platten durch Qualitätskontrolltests zu überwachen, so dass eine Verschlechterung festgestellt werden kann, und die Lagerzeit genau bestimmt. Einfache Wägen Tests von frischen und gelagerten Platten werden die Geschwindigkeit des Feuchtigkeitsverlustes bestimmen. Gewichtsverlust von mehr als 5% einen signifikanten Verlust von Wasser zeigen.
Gaserzeugungs Kits. Lagerung bei 2-8 ° C in einem trockenen Ort. speichert diese Kits nicht für längere Zeit bei einer höheren Temperatur. Haltbarkeit 3 Jahre.
Sterile Reagenzien. Lagerung bei 2-8 ° C, ausgenommen Pferdeserum bei -20 bis + 8 ° C.
Empfänglichkeit Discs. Lagerung bei -20 ° C, aber halten Lagern bei 2-8 ° C zu arbeiten. Haltbarkeit 1 bis 2 Jahre.
Herstellung von dehydrierten Medien
Lagerbedingungen sind in der Regel auf dem Etikett angegeben und sollten befolgt werden.
1 # 9; Schreiben auf dem Etikett das Datum des Eingangs im Labor.
2 # 9; Store als auf dem Etikett angegeben ist; in der Regel unter 25 ° C in einem trockenen Bereich, vor direkter Sonneneinstrahlung, Autoklaven, Trockenöfen oder anderen Wärmequellen.
3 # 9; Überprüfen Sie Verfallsdatum auf dem Etikett, einige Medien haben deutlich kürzere Haltbarkeitszeiten als andere.
4 # 9; Verwenden Lager in Los / Chargennummer bestellen. Verwenden Sie keine neue Flasche geöffnet, bis die vorherige Flasche geleert wurde. Hinweis auf dem Etikett das Datum der Behälter zum ersten Mal geöffnet wird. Nach dem Gebrauch sicher, dass der Behälter dicht geschlossen ist und sendet es an den angegebenen Speicherbereich.
5 # 9, um das Medium in einer geeigneten Größe des Behältnisses Reihenfolge und in einer Menge, die in den normalen Nutzungsanforderungen entspricht. Ein Medium in einem großen Behälter, der bei der Lagerung verschlechtert sich oft geöffnet wurde. Entsorgen Sie das Medium, wenn das Pulver nicht frei fließend ist, wenn die Farbe geändert hat oder wenn es in irgendeiner Weise abnormal erscheint.
Die Rekonstitution von dehydriert Medien
Eine vollständige Anleitung zur Herstellung von Kulturmedien sind auf dem Etikett jeder Flasche gegeben. In der Regel ist es ratsam, nur eine Woche Anforderung vorzubereiten.
2 # 9; Vorbereiten des Mediums in einem Gefäß, etwa zweimal das Endvolumen des Mediums eine ausreichende Durchmischung zu ermöglichen. Folgen Sie den auf dem Etikett jedes Produkts Anweisungen.
Agar-freien Medien werden in der Regel auf vorsichtiges Rühren auflösen. Medien, die Agar-Agar sollte vor dem Autoklavieren aufzulösen erhitzt werden. Bringen Sie das Medium zum Kochen ohne Anbrennen oder Verbrennen. Die meisten Kulturmedien werden für 20 Minuten bei 121 ° C in einem Autoklaven endgültige Sterilisation erfordern.
Der pH-Wert des entwässerten Mediums wurde vom Hersteller so eingestellt, dass der endgültige pH-Wert des hergestellten Mediums mit der Etikett-Spezifikation entspricht, wenn das Medium auf 25 ° C abgekühlt worden. Sie nicht, den pH-Wert von dehydrierten Medien einzustellen vor der Sterilisation.
Sterilisation von Kulturmedien
Obwohl Sterilisation von Kulturmedien bei Temperaturen zwischen 121-134 ° C in einem Dampfautoklaven am besten durchgeführt, muss anerkannt werden, dass eine Beschädigung des Mediums durch den Erhitzungsprozess verursacht wird.
Wärmebehandlung von komplexen Nährmedien, die Peptide, Zucker, Mineralien und Metallen Ergebnisse in Nährstoffe Zerstörung enthält, entweder durch direkte thermische Zersetzung oder durch Reaktion zwischen den Komponenten des Mediums.
Toxische Produkte von chemooxidation verursacht wird, kann auch während der Wärmebehandlung gebildet werden. Es ist daher wichtig, den Erwärmungsprozess zu optimieren, so dass ein Medium nach dem Erhitzen steril ist aber minimal Schaden wird auf die Inhaltsstoffe des Mediums verursacht. In der Regel ist es akzeptiert, dass kurzzeitige, sind Hochtemperaturprozesse tödliche Organismen und chemisch weniger schädlich als länger sind, niedrigere Temperaturprozesse z.B. 3 Minuten bei 134 ° C sind bevorzugt, und 20 Minuten bei 115 ° C.
Eine allgemeine Anweisung zum Sterilisieren von Kulturmedien in Mengen bis zu einem Liter bei 121 ° C für 20 Minuten wird auf jedes Etikett angegeben. Autoklaven variiert in der Leistung, aber, und Thermoelement-Tests unterschiedliche Volumina von Medien sollten die ‚Aufheiz- und‚zu bestimmen, durchgeführt werden Abkühlphase‘Zeiten. Es wird entscheidend sein, dies zu tun, wenn Mengen von Medien größer als zwei Liter hergestellt werden. Um eine Überhitzung großvolumige Medieneinheiten zu vermeiden, ist der ‚Wärme-up‘ und ‚Cool-down‘ Zeiten werden in der Regel in die 121 ° C Haltezeit integriert.
Der Sterilisationszyklus kann in seine vier Stufen unterteilt werden:
Stufe 1 20 ° -121 ° C Kammer Aufheizzeit
Die Kammer Aufheizzeit hängt von der Effizienz des Autoklaven (Luftentladung / Dampf-Eingang) und der Größe der Last in der Kammer. Die Zeit für diese Stufe erforderlich ist, mit einer Aufzeichnungssonde gemessen in der Luftablassventil in der Basis der Kammer angeordnet befindet.
Stufe 2 <100°-121°C Heat penetration time of the medium container
Volumen (ml) in Glasflaschen # 9; Zeit (min)
100 ml # 9; # 9, # 9; 19 min
500 ml # 9; # 9, # 9; 18 min
5000 ml # 9; # 9, # 9; 37 min
Diese Zeiten gehen davon aus, dass Agar-Medien vor dem Autoklavieren gelöst wurden. Es wird auch angenommen, dass die maximale Belastung durch Dampf möglich ist. Somit, obwohl die einzelne L00 ml Flasche 12 Minuten benötigte 121 ° C zu erreichen, wenn es in einer Kiste mit dem anderen Flaschen gegeben benötigte es 19 Minuten, und wenn in der Mitte von gestapelten Kisten platziert benötigte es 30 Minuten.
Stufe 3 121 ° -121 ° C Haltezeit bei der vorgeschriebenen Temperatur
Die Haltezeit bei 121 ° C ist abhängig von (i) die Anzahl der ursprünglich vorhandenen Organismen in dem Medium (ii) die Bruchzahl eines Organismus vorhanden angenommen, beispielsweise nach Erwärmen N = 0,001 entspricht eine Flasche von 1000 Flaschen erhitzten kontaminiert wird (iii) die konstante thermische Todesrate des vermutlichen Organismus vorhanden bei 121 ° C.
Die empfohlenen Haltezeiten sind:
Temperatur (° C) # 9; 121 # 9; 126 # 9; 134
Zeit (Minuten) # 9; 20 # 9; 10 # 9; 3
Stufe 4 121 ° - 80 ° C Abkühlzeit für die Kammer zu erreichen 80 ° C
Die Abkühlzeit hängt von der Größe der Last in der Kammer und die Wärmeverlustrate aus dem Autoklaven. Wassersprays verwendet Kühlung in kommerziellen Sterilisatoren zu beschleunigen, aber sehr sorgfältige Kontrolle ist erforderlich, Flaschenbruch und das Eindringen des Kühlspray in das sterilisierte Medium zu vermeiden. Das letztere Problem tritt auf, wenn das Vakuum in dem Kopfraum während des Abkühlens verunreinigten Kühl gebildet saugt das Gewinde der Kappe nach oben und Flüssigkeit in die Flasche.
Alle Autoklaven sollten in festen Zeiträumen überprüft werden, um sicherzustellen, dass sie effizient funktionieren. Physikalische Messungen sollten von der Temperatur und Druckmessungen durchgeführt werden, sollte die Qualität des Dampfes überprüft werden, die Effizienz der ‚nahe-zu-Dampf‘ Lufteinschlüsse in dem Boden des Autoklaven soll und die Sicherheitsventile geprüft bestimmt werden. Obligatorische Überprüfungen von Autoklaven als Druckbehälter werden in der Regel durchgeführt jährlich von Fachleuten unter Anweisungen von Versicherer einer solchen Vorrichtung. Mit kleinen Laborautoklaven ist diese Prüfung nicht zwingend.
Chemische Indikatoren wird die Temperatur erreicht oder überschritten zeigen und einige Zeit bei der angegebenen Temperatur gehalten anzuzeigen. Unter-Autoklaven sind in der Regel selbstverständlich, weil Versagen all Bakteriensporen von Natur aus in dehydrierten Medien (das ‚Bioburden‘) Wachstum stattfindet in dem gespeicherten oder inkubiert Medium ermöglichen es zu zerstören. Versagen der Sterilisation sollte immer vermutet, wenn die Verseuchung von vorbereiteten Medien mit Sporing Organismen auftritt. Biologische Indikatoren für die Sterilisation wird die Fähigkeit des Autoklaven demonstrieren, um bakterielle Sporen zu zerstören.
Überhitzen ist eine häufige Ursache für eine pH-Verschiebung, Verdunklung, Präzipitation, schlechter Gelfestigkeit und reduzierte bakteriologischer Leistung. Diese Effekte können auch hergestellt werden, wenn ein konzentrierter ‚Pool‘ von Zutaten am Boden des Behälters erwärmt wird. Alle Kulturmedien sollen in der Lösung vor der Sterilisation sein. Dadurch wird das Auftreten von Maillard-Reaktionen (non-enzymatische Bräunung) stattfindet, in dem Medium reduzieren.
Hitzen Effekte auftreten, wenn Agar-Medien erlaubt sind in Flaschen zu gelieren und werden später dampfte das Agar zu schmelzen. Sie werden auch auftreten, wenn geschmolzene Medien bei 50 ° C gehalten werden, für mehr als 3 Stunden vor dem Gebrauch. Agar-Medien mit pH-Werten bei oder unter 5,0 sind sehr empfindlich in irgendeiner Form zu einer Überhitzung, da das Agar hydrolysiert und die Gelfestigkeit ausfällt. Es wird empfohlen, das Agar von Medien von einem pH-Wert von weniger als 5,0 separat zu sterilisieren.
Die meisten Schwierigkeiten in Kulturmedien Sterilisation auftreten, wenn große Stückzahlen von Medien (> 2 Liter) verarbeitet werden müssen. Die beste Lösung für dieses Problem ist die Verwendung eines Kulturmediums Präparator. Diese halbautomatischen Prozessoren, hergestellt von New Brunswick und anderen Herstellern zu überwinden das Problem des schlechten Wärme Eindringen von Agar durch ein kontinuierliches Rühren oder Bewegen des Mediums während der Aufheizphase. Solche Präparatoren werden die Zeit für die Sterilisation bei 134 ° C bei 121 ° C oder in einigen Modellen erforderlich erheblich reduzieren. Sie sind stark wegen ihrer hohen Effizienz und minimale Schäden an Kulturmedien empfohlen.
Fehlertabelle und mögliche Ursachen in Mediensterilisation
pH-Test durch über 25 ° C aus. Hitzen bei längeren Sterilisations, Umschmelzen oder überlangen Zeitraum bei 50 ° C. Unvollständige Lösung des Mediums. Schlechte Qualität von Wasser oder Containern. Dehydrierte Medium falsch oder außerhalb der angegebenen Haltbarkeitsdauer gespeichert.
Schlechte Qualität von Wasser oder Containern. Überhitzungen oder längere Lagerung bei 50 ° C. pH-Wert nicht korrekt. Unvollständige Lösung.