Wie machen Buffy-Coat-Abstrich
Buffy coat / Mikrohämatokrit Technik
- warum verwenden Konzentrierungs von centrifugaton, gefolgt von Licht und Fluoreszenzmikroskop Prüfung, mehr Färbetechniken mit zur Visualisierung von Mikroben?
Nach Zentrifugation einer antikoagulierten (EDTA oder Citrat) Vollblutprobe, nassen Tropfen (1 Bluttropfens
Borrelia (und wahrscheinlich auch andere Spirochäten?)
befleckt gelb nach rot-orange (einzelsträngige DNA und RNA) mit Acridinorange - Beispiele:
Trypanosoma
"Die QBC Malaria Methode ist die einfachste und empfindlichste Methode für die folgenden Krankheiten zu diagnostizieren.
Malaria Babesiose Trypanosomiasis (Chagas-Krankheit, Schlafkrankheit) Filariose (Elephantiasis, Loa-Loa) schub Fever (Borreliosis)
Einige Forschungs Referenzen werden hier gezeigt. "
Die Fluoreszenzmikroskopie Ausrüstung (erschwinglich).
"Fluoreszenz-Antikörper (FA) -Technik, die auch als Immunofluoreszenz bekannt ist, ist ein ausgezeichnetes schnellen Diagnoseverfahren. FA leicht gemacht wird, empfindlich, spezifisch und relativ preiswert. Es ist äußerst vielseitig. FA erkennt und identifiziert sowohl Erreger der Krankheit (direkte FA
Beschreibung: Affinity polyklonalen Antikörper gegen Borrelia burgdorferi gereinigt hergestellt in Ziegen und markiert mit Fluoresceinisothiocyanat (FITC). Isoliert von einem Serumpool von mit Hitze abgetöteten ganzen Zellen von Borrelia burgdorferi immunisierten Ziegen. Der Antikörper ist für Borrelia burgdorferi hochspezifisch. Kreuzreaktivität gegen Borrelia hermsii, Borrelia coriaceae und Borrelia anserina wurde durch umfangreiche Affinitätsadsorption minimzed. Das Produkt ist in gefriergetrockneter Form. Jede Charge wird getestet Spezifität zu gewährleisten und viel zu viel Konsistenz KPL in-house ELISA-Test verwendet wird.
„Eine Kamera kann für die digitale Bildaufzeichnung mit dem Fototubus ausgestattet werden. Das Umschalten zwischen der Kamera und den Okularen ist nicht erforderlich, aufgrund der günstigen 50/50 Strahlteiler. Für die Anzeige und Verwaltung von digital aufgenommenen Fluoreszenzbilder bieten wir die effiziente EURO-Picture Programm. Das Standard-Eurostar III plus ist mit einer Halogenlampe ausgestattet für die normalen Durchlichtmikroskopie in hell~~POS=TRUNC und dunkel~~POS=TRUNC und können für Phasenkontrast aufgerüstet werden.“
SO - abschließend mit modernen Geräten eine LED-Lichtquelle mit geringen Energiebedarf und sehr langen Lebensdauer, ist es nicht mehr extrem teuer, ein Mikroskopsystem zu erhalten, die Fluoreszenzmikroskopie und Licht / Phasenkontrast / Dunkelfeld tun.
Die Herausforderung besteht darin, eine an das Mikroskop geeignet und wellfunctoning Mikroskop-Kamera zu finden, die leicht zu und werden angetrieben von einem beliebigen Computer über USB anschließen können!
Es muss eine ziemlich hohe Auflösung hat und nicht zuletzt muss genügend Licht empfindlich sein, um zu ermöglichen schöne Bilder und / oder Videos aufzunehmen, wie dargestellt. Während Mikroskopie kann das Video läuft und kopieren Sie alle gesehen, Schnappschüsse und Videoclips aus der Rohfilm kann später extrahiert werden. Dies macht es viel einfache Mikroben zu finden, auch eine sehr dünnen / schlanken Spirochäten, dh entweder gebeizt orangerot durch Acridinorange (billig, siehe Bilder oben) oder grün mit FITC-markierten Borrelia-spezifischen Antikörpern (siehe unten). - eine einzige grüne Spirochäten gegen einen sehr schwarzen Hintergrund fotografiert wird sehr Kamera fordernd, kann ich fotografiere leider eine dünne grünen Spirochäten auf einem schwarzen Hintergrund mit meiner Kamera, obwohl es nur möglich ist, solche in dem Mikroskop zu sehen!
Erschwingliche Mikroskopkameras wie die DinoLite Serie gibt es in vielen verschiedenen Ausführungen; Ich benutze jetzt den DinoLite AM4023X für mein altes Leitz Laborlux III Mikroskop anno 1957, weil ich für die trinokularen oben nicht habe; aber - obwohl es eine höhere Auflösung von 3 Megapixel hat - es ist leider nicht ganz so leicht sinnvoll, da meine alte Bresser Microocular II Kamera (Bild), das sehr große Problem mit meiner alten Bresser Mikrokamera ist, dass es hat nur VGA-Auflösung (640x480 Pixel ) und schlimmer noch, es gibt nur 32-Bit-Treiber für dieses 32-Bit-Gerät, dh es werden keine Treiber kann es auf einem 64-Bit-Windows (Vista-64 oder 7) System funktioniert, deshalb musste ich nach einer neuen Kamera kaufen Verschiebung zu einem Windows7 Computersystem!
Borrelia burgdorferi spezifischer direkte Fluoreszenz (FITC) Immun Fleck.
Beachten Sie, dass die oben Borrelia burgdorferi Spirochäten sehen nicht sehr schraubte
(In TBRF die Spirochäten Bilder wirken oft mehr als gewendelten B. burgdorferi).
ABER alle, die behaupten, dass Borrelia burgdorferi Spirochäten hat so und so viele Spulen
und ist immer mit einer bestimmten Länge und Dicken
- und sagen, dass das, was ich Spirochäten nennen sehen nicht wie ideale Borrelia-Spirochäten aus Bildern
- offensichtlich nicht verbringen Jahre haben die Morphologie zu studieren und
Bewegungen von lebende Spirochäten im Mikroskop selbst!
Ein immunokompetente Recurrens Borrelia Patienten werden in der Regel 10 bis 30 Schübe bekommen, bevor die Krankheit „burn out“, wenn das Immunsystem der Kontrolle über die mikrobielle Proliferation erreicht. wahrscheinlich ebenfalls für die meisten Patienten mit Borrelia burgdorferi infiziert?
Symptom Fackeln (Angriffe) werden nach und nach in der Schweren vermindern (bezogen auf die Menge von Spirochäten, die das Blut gelangt und Reaktions Komplementkaskade erhöhen (Sie sollten Ergänzung Spaltprodukte, falls verfügbar messen) und proinflammatorische Zytokin-Sturm (TNF => Fieber, IL-1, IL-6.) und spät im Verlauf auch die Intervalle zwischen den Schüben zunehmen, solange die Infektion unter Kontrolle gehalten wird (durch das Immunsystem und / oder Antibiotika), dann Spirochäten neu gebildet werden, nicht selbst wöchentlich erlaubt mehr zu reproduzieren .
Zyklizität wurde auch von Willy Burgdorfer zur Kenntnis genommen.
31 Monate beträgt circa 2. Jahre!
„Nach unserer Erfahrung ist es immer noch möglich, die krankheitserregenden Bakterien zu erkennen, wenn es weniger als 10 Bakterien in einem Milliliter zentrifugiert nativen Blutproben. Im Vergleich dazu die Schwelle für den Nachweis der Lyme-Borreliose mit PCR, die derzeit am meisten angesehen empfindlich, aber nur in speziell ausgestatteten Labors durchgeführt werden, ist zwischen 40 und 100 Keimen pro ml;. dabei möglichst viele Primer, die spezifisch auf verschiedene Unterstämme sollten zur Verfügung stehen“
„Wir schlossen daraus, dass der AO Fleck ist einfach, schnell und empfindlicher als Romanowsky Verfahren für Fälle von Low-Level-Spirochaetämie zu erkennen.“
„In Laborstudien, die Borrelia burgdorferi als Modell verwendet, entdeckten wir Spirochäten so niedrig wie 10 Organismen / mm3 bei Konzentrationen. Während die Zahl der positiven Ablesungen mittels von gefärbten Blutausstrichen beurteilt signifikant sank bei Verdünnungen unter 3.263 Organismen / mm3. T er eine größere Empfindlichkeit der QBC Technik ist wichtig in Bereichen, in denen Borrelia heimisch ist. "
Anmerkung 10 / mm 3 = 10 / & mgr; l, das heißt um 500 Organismen pro entsprechen suchten Bluttropfen; Anzahl der Spirochäten in RF ist viel, viel höher ist als in der Lyme-Borreliose, wo> 7 Organismen pro Tropfen ist „viele“!
Die Anwendung von Acridinorange-Färbung auf ein niedriges Niveau von Babesia diver Parasitämien zu quantifizieren. (1974)
Hinweis: Es wurde von einigen vorgeschlagen, sich zu bewegen / umbenennen Babesia microti zu Theileria microti. basierend auf einer engeren genetische Verwandtschaft dieser Gruppe zu Theileria, als an anderen Babesia spp.
Theileria beide Lymphozyten und roten Blutkörperchen infizieren und kann mehrkernigen intralymphocytic Schizonten bilden. Mehr über Theileria in diesem PDF.
Dehnungsvariation machen kommerziellen serologischen Tests, die unzuverlässig auf einem einzigen Stamm basieren, dh ein hohes Risiko von lokal infizierten Patienten nur grenzwertig positive oder falsch negative Antikörper Ergebnis zeigt, wenn ein kommerzieller Antikörper-Kits mit fremden Stämmen aus entfernten Gebieten verwendet wird, die zu unterschiedlich sind in Antigen-Expression von den lokalen Varianten.
2. Während des Auftreten von Babesia-Infektion in der europäischen Zecken im Allgemeinen gering, mit aktuellen PCR-Tests gefunden (
WEDER SSI (noch CDC) HAT Bothered US IN IHREN TESTBERICHTE GENAU DIE Babesia Antigene und PCR PRIMER SIE IN DEM NEGATIVEN TEST zu INFORMIEREN USED!
Erforderliche Informationen entfernt wird, um „VERNüNFTIGEN ZWEIFEL“, dass die Ergebnisse könnten alle falsch negativ, weil sie falsch Stämme mit LOW ÄHNLICHKEIT TO lokalen Dehnungen CHOSE!
Proper Case UNTERSUCHUNG UND BEFOHLEN ÜBERWACHUNG OCCURRENCE ALLE Zecken übertragener Infektionen ERFORDERLICH, besser spät als nie!
- mit den sehr empfindlichste diagnostischen Methoden natürlich!
Eine dänische Sprichwort „Not lehrt eine nackte Frau, die Kleidung zu machen“. weil ich nicht die richtige Diagnose helfen, mir durch meine dänischen Kollegen, Tests wurde erhalten habe in der veröffentlichten Literatur beschrieben verweigert wurde ich auf „do-it-myself“ gezwungen und eine andere Art und Weise, mit der Hilfe von guten Kollegen im Ausland zu finden, und die Erfahrung gewann daraus, führte mich ein wenig Forschungsprojekt über Patienten mit ähnlicher Geschichte und Symptomen zu tun.
HINWEIS: Alle Behandlungsstudien zur Wirkung von Antibiotika-Behandlung werden nur bei Patienten mit negativem direktem Test auf Borrelien geschehen. so natürlich gibt es kaum Vorteile von Antibiotika-Behandlung bei diesen Versuchen!
Wenn wir wirklich für DERZEIT ACTIVE Borrelien-Infektion Ergebnisse der Behandlung mit Antibiotika wollen bewerten, müssen wir 100% sicher sein, dass der Patient wirklich eine Zeit aktive Borrelien-Infektion HAT!
. wir müssen in der Lage sein, die Borrelia (Antigen) Infektion zuverlässig mit direkten optimierten Methoden (Tagebuch, Mikroskopie, Kultur, PCR) vor der Aufnahme von Patienten in eine Studie zur Therapie zu erfassen. weil viele Fälle mit „post-Lyme“ persistierenden Symptomen (Nervenschädigung) mit negativen Antigen-Test wird natürlich Skew die Ergebnisse in Richtung NO gewisse Wirkung im Verhältnis mit der Gruppe der Einschreibung, die nicht mehr Aktivitätszyklus (wöchentlich, monatlich) hat - vorherige Studien wie Klempner ist Pseudowissenschaft, ist niemand nützlich, ist eher sehr schädlich für diejenigen wirklich infizierten, die treament verweigert werden, die ihnen wirklich helfen kann!
„Anschließende Tests von Serumproben von beiden [Babesia EU1] Patienten zeigten IFA-Reaktivität zu diver B. aber nicht beschränkt auf Antigene B. microti; Serum aus dem italienischen Patienten ebenfalls auf Reaktivität gegenüber Antigenen WA1 getestet und war negativ.“
Zum Vergleich: Der dänischen Patienten Titer an unbekanntem Testantigen betrug 1: 125.
„Die Co-Infektionsrate dieser Erreger gefunden wurde eher gering (Borrelia spp./Anaplasma phagocytophilum - 4,2%, 1/24;. Borrelia spp spp./Babesia - 4,2%, 1/24). Aufgrund die erhöhte Prävalenz von Borrelia spp. in Ixodes ricinus Zecken in Polen und die jüngste Entwicklung neuer Zecken übertragenen Infektionen, ist es notwendig, sorgfältig die wahre Gefahr der Infektion mit mehreren Erregern mit empfindlichen und zuverlässigen Diagnose-Tool zu bewerten.
Dies ist der erste Bericht über die menschliche Infektion mit Babesia spp. in Polen, die durch molekulare Techniken mit Homologie von 98,9% auf B. divergens oder Babesien EU1 bestätigt wurde. "
„Human Koinfektionen mit den Krankheitserreger Borrelia spp. Und A. phagocytophilum mit klinisch (Erythema migrans) und serologisch (Serokonversion) bestätigt Lyme-Borreliose sowie asymptomatischen Anaplasmose (positive Serologie oder PCR für A. phagocytophilum) wurden in Polen beschrieben [ 12, 17] und andere Länder [23, 25]. Dennoch zeigen die wenige früheren Berichte solcher Co-Infektionen, dass die resultierende Krankheit schwerer und verlängert ist [39 *]. Seit den späten 1950er Jahren, zwei Arten von Babesia, B . diver von Rindern in Europa und B. microti von Nagetieren in den nordöstlichen und oberen Mittleren Westen Teilen der USA, wurden Menschen [26]. die Spezies B. microti, B. divergens, B. odocoilei artige infizieren gezeigt, und Babesia EU1 sind dafür bekannt, in I. ricinus verbreitet sein Zecken in ganz Europa, darunter Polen [9, 15, 33, 43].“ [Keine klinische Fallbeschreibung]
Solange es noch nicht allgemein verfügbar zu uns für die Diagnose Genotypisierung werden wir nie mit Sicherheit, welche Art von Borrelia (n) weiß, dass der Patient mit infiziert wurde!
Wir brauchen den Zugang zu Kultur für Borrelia (zumindest in den Fällen, die auf Standard-tretment für Borrelia nicht gut erhalten) sowie Co-Infektionen bei chronischem spät oder anhaltenden Lyme vermuten Borreliose, wo die antigenspezifische Diagnose von Borrelien Notwendigkeit Unterstützung für Behandlung und Hilfe bei der Wahl der Behandlung.
Der entscheidende Punkt bei der Diagnose einer aktiven Infektion ist leicht, einfach nämlich das Wiederauftreten der zyklischen KLINISCHEN RELAPSE Muster. Die sie erlaubt, Spirochäten im Blut durch MIKROSKOPIE während des ersten Tages JEDER ACTIVE FLARE Periode zu erfassen. im Blut zu anderen Zeiten genommen Spirochäten sind in der Regel nicht nachweisbar!
Wenn der Patient ein „wöchentlich“ Rückfall Muster Spirochäten hat, kann in 1 pro 10 Tage des Zyklus (10% ige Chance Glück zu fangen, während das Risiko den Fang von fehlenden 90%) festgestellt werden; bei Patienten auf einer monatlichen Zyklus 1 pro 30 Tagen ist die Chance auf Glück fangen 3%, während die Chance, den Fang von fehlenden 97%), wenn der Arzt für den direkten Nachweis ersten Tag eines neuen Aufflackern geschieht nicht die Abtastzeit !
Das Antigen in meinem Projekt Fall reagierte mit zusätzlichem Borrelia-Antikörper, der von dem Hersteller für TBRF Arten und getestet aufgenommen worden für Borrelia burgdorferi sensu lato (KPL) um genau zu sein.
Erst wenn wir wissen, welche Belastung der Patienten haben und klinischen Status vergleichen können, wird es möglich werden, die klinische Bedeutung der verschiedenen Stämme der Lyme-Borrelien zu bewerten!
Das Auftreten von Babesia spp. Rickettsia spp. und Bartonella spp. in Ixodes ricinus in bayerischen öffentlichen Parks, Deutschland.
=> Verhältnis von Babesia venatorum (EU1): Babesia divergens in den bayerischen Park Zecken gefunden war 25: 1
dh Menschen und Haustiere zu besuchen, dass Stadtpark 25 mal relativ höher ist das Risiko einer Infektion mit Babesia EU1 im Vergleich zu Babesia diver bekommen, das heißt, wenn sie eine Babesia-Infektion, da weniger als 1% der untersuchten Zecken gefunden wurden mit Babesien infizierten Spezies das allgemeine Risiko Babesia Infektion von aquiring ist immer noch recht niedrig!
“. Pathogen Prävalenzraten wurden durch Polymerase-Kettenreaktion Detektion und Sequenzierung in questing ausgewertet Zecken, individuell für Erwachsene und in Pools von 10 für Nymphen. Neben der Suche nach Mikroorganismen Symbionten entspricht, wir hohe Prävalenzraten von B. burgdorferi sl gefunden (32% der erwachsenen Frauen und 10% der Nymphen) niedrig diejenigen von Anaplasma phagocytophilum bis mäßig (
1%). Fleckfieber-Gruppe Rickettsia spp. (
6%). Babesia sp. EU1 (
1%). Barton birtlesii (0,1%) und Francisella tularensis (! 1%).
Unsere Ergebnisse die Kenntnis der geografischen Verteilung dieser endemisch und emergent Erreger erweitern und den Schluss, dass Zecken sind wichtige Träger von pathogenen Mikroorganismen in einem Vorort von Wäldern. Außerdem kreuze Koinfektion mit mehreren Krankheitserregern gefunden wurde häufig auftreten, die für die Diagnose und angemessene Behandlung eine ernsthafte Herausforderung dar. Die Strafbarkeit dieser Erreger in potenziell schweren Erkrankungen erfordert eine breit gefächerte Überwachung das Risiko einer Infektion zu bewerten, wodurch die Diagnose und Behandlung zu erleichtern, sowie eine Anhebung lokales Bewusstseins für durch Zecken übertragenen Krankheiten.“Und
„Die Prävalenz von Babesia spp. Erreichte 2,4% und Identifikation auf Artniveau ergab B. venatorum (1,7%) und B. microti (0,4%).“
Diese Sorte wird als Babesia-gibsoni artig beschrieben und ist dafür bekannt, mit Babesien gibsoni reagiert in der Serologie-Test zu überqueren, während Patienten mit Babesien WA1 in der Regel Test negativ auf Antikörper-Test für B. microti!
- oben ref. aus dem deutschen Stadtpark 1 beschrieben Babesia gibsoni artigen finden. vielleicht ist es eng verwandt WA1 ähnliche genannt zu werden, da WA1 auch B. gibsoni artig ist?
„Zwei der Patienten mit erhöhten Titer an WA1 hatte einen längeren Krankheitsverlauf, einen mit erhöhten Leberenzymen.“
Der entscheidende Punkt.
Neg. Antikörper-Test und negative PCR-Test kann nicht auszuschließen Babesia Infektionen verwendet werden, vor allem nicht, wenn ringforms durch einfache Mikroskopie nachgewiesen werden, die als „Goldstandard“ Test noch bleibt!
Negatives dünnes und dickes Blutausstrichen kann nicht verwendet wird o zu regieren
QBC Quantitative buffy-coat-Verfahren.
Hinweis: Die QBC ist als Bildschirm-Methode schnell und empfindliche, aber wenn positiv durch QBC normale dünne und dicke Blutausstrichen Untersuchungen auch getan werden soll, für eine optimale Dehnungs Identifizierung
„Wir schließen daraus, dass der QBC schneller ist, mit hohen Empfindlichkeit und werden in klinischem und epidemiologischen Screening als nützlich erweisen, vor allem, wenn Parasitämie ist gering.“