Herstellung von Agarplatten

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Wachstum und Prüfung der Bakterienstämme

Luria-Bertani (LB) Platten mit dem geeigneten Antibiotikum für die Selektion werden für die Plattierung Transformationen hergestellt werden.

HINWEIS: LB-Agar wurde für Sie vorbereitet; die Informationen über die Medien ist hier enthalten, so dass Sie die Inhalte kennen.
Rezept für Luria-Bertani (LB) Agar (pro Liter):
1% Bactotrypton = 10 g
0,5% Hefeextrakt = 5 g
85 mM NaCl = 5 g
1,5% Bacto-Agar 15 g =

* PH-Wert mit NaOH auf 7,0 einstellen und auf 1 l bringen; bei 121 ° C im Autoklaven für 20 Minuten bei 15 psi sterilisiert
** autoklavierten Medium wird immer vor auf 50-60 ° C abgekühlt, um die Zugabe von Antibiotika und einigen Salz, die durch Behandlung im Autoklaven inaktiviert oder ausgefällt werden; die Agar Halten bei dieser Temperatur verhindert Erstarren

sterile Technik

PROTOKOLL (als Team)

Beschriften die Böden von 4 Petrischalen mit dem Typ der Agar und antibiotischen Typ / Konzentration; legte auch das Datum und die Teamnummer. Die Bodenprodukte markiert sind, weil die Deckel mühelos getrennt werden können; Auch sind die Platten in der Regel umgekehrte gehandhabt.

Bevor Sie beginnen, stellen Sie sicher, Handschuhe entfernen und Haar nach hinten ziehen.
  1. Stapel 4 Petrischalen (rechts oben)
  2. Schalten Sie Gas auf halbem Weg und Licht Bunsenbrenner mit Schlag
  3. Swirl großen Kolben von LB-Agar bei 50-60 ° C gehalten Inhalt gut zu mischen
  4. Übertragung
100 ml LB-Agar in einen sterilen Kolben und fügen Sie das entsprechende Antibiotikum Lager in einem 1: 1000-Verhältnis (1 & mgr; l des Antibiotikums für je ml Medium); mischen durch vorsichtiges Schwenken aber vermeiden Blasen und halten die Medien steril zu schaffen
*** Verwenden Sie sterile Technik - die Medien nicht verunreinigen ***
  • Unter Verwendung einer sterilen Technik gießen 20-25 ml LB-Agar in einer Petrischale (genug, um den Boden der Schale zu bedecken)
    • Arbeiten schnell, die Platten zu gießen; der Agar beginnt in 5 Minuten mit dem Kolben bei Raumtemperatur gerinnen
    • Stapeln der Platten beim Schütten spart Platz und wird durch Anheben des Stapels von 3 leere Platten durch den Deckel der untersten Platte erreicht. Agar wird in die Petrischale gegossen und der Stapel ersetzt ist; bewegen Sie Ihre Hand auf den zweiten Deckel und Lifte wieder den Stapel die zweite Schale von Agar zu gießen; Wiederholen, bis alle die Platten in dem Stapel ausgegossen sind
    • Blasen auf der Oberfläche der Medien können schnell über die Blasen durch Hindurchleiten der Flamme beseitigt werden
  • Schalten Sie das Gas!
  • Gießen alle verbleibenden Medien in den Mülleimer und auszuspülen Kolben mit RO-Wasser
  • Lassen Sie die Platten bei Raumtemperatur stehen, bis sie (30-45 Minuten) und Speicher in Kunststoff und invertiert bei 4 ° C geronnen sind

    • Wir möchten, dass New England Biolabs für ihre großzügige Unterstützung dieses Praktikum danken

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