McClean Glycerin-Stammlösungen (Hefe)
Hefestämme können fast unbegrenzt bei -80 ° C in Glycerinstamm gehalten werden. Sie müssen sicherstellen, dass, sobald Sie eine bestätigte Stamm (Bestätigung durch Kolonie-PCR, Sequenzierung, Paarungstypprüfung, etc.) haben Sie es einfrieren nach unten als Glycerolstammlösung im Hauptlabor Datenbank.
- Sterile 30% Glycerinlösung
- Kryoröhrchen (Fisher # 12-565-163N; Nunc # 375.418)
- CryoTube Kappen, Yellow (Fisher # 12-565-246; Nunc # 355077)
Anleitung
Hinweis: Sie werden zum Einfrieren nach unten zwei Fläschchen Kultur, eine für die Haupt--80 ° C Aktien und die andere für die Sicherung -80 ° C Aktien.
- Fügen Sie den Stamm in das Labor Datenbank McClean und weisen Sie ihm eine ymm ID. Wenn dies das erste Mal ist etwas in die Datenbank eingegeben haben, sprechen Sie bitte mit Megan. Einige Mitglieder des Labors nicht haben Zugriff auf die Hauptdatenbank, in welchem Fall Sie Megan fragen sollten den Datenbankeintrag für Sie zu erstellen.
- Von einer Platte, eine einzelne Kolonie holen.
- Impfen der Zellen über Nacht in YPD (oder selektive Medien, wenn sie Plasmide enthalten) und wächst bei 30 ° C, so dass am Morgen man eine gesättigte Kultur hat.
- Setzen 900 ul der sterilen 30% igem Glycerin in zwei Kryoröhrchen (900 ul pro jedes Fläschchen).
- In 900 ul der gesättigten Kultur über Nacht zu jedem Cryovial.
- Kehren Sie die mehrmals Fläschchen zu mischen.
- Legen Sie eine gelbe Kappe auf jedem Fläschchen. Beschriften der Oberseite jedes Kryoröhrchen mit genau der Anzahl ymm (d ‚100‘) und beschriften der Seite jedes Rohr mit der ymm Nummer, das Datum, die Initialen und jede andere nützliche Informationen.
- Fügen Sie ein Rohr an der entsprechenden ymm Lager-Box in der Haupt -80 ° C gekühlt und die anderen Fläschchen auf die Backup-Lager-Box. Nicht die Verwendung -20 ° C Gefrierschrank, Glycerin Aktien halten nicht Lebensfähigkeit oberhalb von etwa -55 ° C.
- Überprüfen Sie, dass die Fläschchen gut markiert sind und in die McClean Labor-Datenbank!
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