Speichern von Bakterienproben für eine optimale Lebensfähigkeits, Thermo Fisher Scientific
Einführung
Die spezifische Länge der Zeit, dass eine Kultur wird in einem bestimmten Lagerbedingungen lebensfähig bleiben, hängt von dem Bakterienstamm. Der Zelltod während der Lagerung ist unvermeidbar, aber sollte so weit wie möglich minimiert werden, was einfache Bedienung verzichten kann. Bakterienkulturen, die verwendet werden regelmäßig (d.h. täglich / wöchentlich) können auf Agarplatten oder in Stichkulturen in einem Standard-Kühlschrank bei 4 ° C gelagert werden. Wenn Kulturen werden nicht für mehr als ein paar Wochen verwendet werden, obwohl, mehr langfristige Lagerung Methoden sollten für eine maximale Lebensfähigkeit von Bakterien (Tabelle 1) in Betracht gezogen werden.
Kurzfristige Lagerung
Langzeitlagerung
Wie oben erwähnt, sind die Temperatur, bei der gefrorenen Bakterien gespeichert beeinflusst, wie lange sie gespeichert werden, während lebensfähig zu bleiben. Einfrieren und Zellen mit einer geeigneten Geschwindigkeit und Aufrechterhaltung der gefrorenen Bestände an der richtigen Lagertemperatur Hilfe Auftauen Schäden durch den Gefrierprozess zu minimieren. Auch, desto größer ist die Zelldichte, desto besser ist die Erholung nach dem Auftauen der Zellen. Für die meisten Bakterien, in ausreichender Wiederherstellung führt eine Dichte von 10 7 Zellen / ml, wenn alle Bedingungen korrekt eingehalten werden. 1-2
Gefrierschutzmittel: Da Wasser in den Zellen auf Eis umgewandelt wird, gelöste Stoffe in dem restlichen freien Wasser anreichern. Diese lokalisierte Erhöhung der Salzkonzentration kann Biomolekülen denaturieren. 3 Darüber hinaus kann die Bildung von Eiskristallen Zellmembranen schädigen. Additive, die mit der Bakteriensuspension vermischt werden vor dem Einfrieren des Gefrierpunktes unteren und schützen die Zellen während des Einfrierens die schädlichen Auswirkungen der erhöhten Konzentration an gelösten Stoffen und die Bildung von Eiskristallen zu minimieren. Die am häufigsten verwendeten Kryoprotektoren sind Dimethylsulfoxid (DMSO) und Glycerin, der bei 5-15% typischerweise verwendet werden, (v / v). Nichtpermeablen Additive als cryopreservants verwendet werden, wie Polysaccharide, Proteine und Dextrane, adsorbiert eine viskose Schicht auf die Oberfläche von Mikroorganismen und bildet die Membranen schützt, wobei diese Mittel besonders nützlich macht für die Kryokonservierung. Andere üblicherweise verwendete Additive schließen Blutserum, Ethylenglykol, Methanol, Magermilch, Hefeextrakte und Tripticase Soja. 4
Gefriertrocknung: Bakterien durch Suspendieren log-Phasen-Zellen in einem Medium Lyophilisation gefriergetrocknet werden kann und dann gefrier Trocknen der Suspension. Nicht alle Bakterien erfolgreich gefriergetrocknet werden. 6-8 Bestimmte Stämme können den Prozess nicht überleben oder sich schnell einmal sterben gefriergetrocknet. Der beste Weg, um zu bestimmen, ob ein Stamm zugänglich ist zu Gefriertrocknung ist empirisch seine Stabilität nach der Gefriertrocknung zu bewerten, während eine Live-Kultur als Backup beibehalten wird. Sobald gefriergetrocknet, ist es am besten, um die Bakterien zu speichern, bei oder unter 4 ° C.